目的比较移动式三气培养箱和厌氧产气袋密闭培养盒2种混合气体法建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型的优缺点,并进一步对培养条件进行优化。方法将处于对数生长期的H9c2心肌细胞分别置于移动式三气培养箱(94%N2、5%CO2、1%O2)和厌氧产气袋密闭培养盒(21%CO2、5%O2)中,分别缺氧不同时间(2、4、6、8、10 h),再进行复氧(95%O2、5%CO2)4 h。采用MTS法检测心肌细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性。采用L(934)正交试验进一步对细胞缺氧时间(6、8、10 h)和细胞培养液条件(血清比例、血糖含量)进行优化,最终确定模型建立的最佳缺氧时间和培养条件。结果 2种造模方法均能使心肌细胞存活率下降,乳酸脱氢酶活性升高。但采用移动式三气培养箱造模的心肌细胞存活率在缺氧4 h后能稳步快速下降(6、8、10 h,与正常对照组比较,P<0.01),LDH活性随着缺氧时间的延长明显增高(6、8、10 h,与正常对照组比较,P<0.01),且该模型重复性较好,稳定可控。而厌氧产气袋模型组的细胞存活率及LDH活性均不随时间规律性变化,较难在短时间内建立稳定、可靠的模型。正交试验结果以缺氧6 h、无糖、无血清作为优化培养条件。结论选择移动式三气培养箱法建立H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型用时短、操作简便,结果相对稳定,将培养液更换为无血清、无糖培养液可加快模型的建立。
wenku.so.com目的探讨氮气(N_2)与连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)在构建H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤模型中的应用价值。方法培养H9C2心肌细胞,当细胞生长状态良好时,分别用N_2、不同浓度的Na_2S_2O_4作用于心肌细胞,在不同时间点检测心肌细胞存活率。结果与空白组比较,各浓度Na_2S_2O_4组的心肌细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常氧对照组比较,各缺氧组的细胞存活率均下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 N_2与Na_2S_2O_4均能造成H9C2心肌细胞缺氧复氧损伤,效果均较为显著。
www.so.com目的 采用非Langendorff方法分离成年小鼠心肌细胞(adult mouse cardiomyocytes, AMCMs),并建立腺病毒转染及缺氧/复氧诱导细胞损伤模型,为应用AMCMs进行心肌缺血体外实验的研究提供便捷、实用、可操作性强的系统方法。方法 应用非Langendorff方法分离AMCMs,观察贴壁后2、24、48及72 h细胞的形态,计算存活率,并应用α-actinin免疫荧光染色观察AMCMs完整性;应用腺病毒转染AMCMs,观察并统计转染36、48 h后的转染效率;通过缺氧45 min/复氧24 h,进行碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色,统计PI阳性细胞率以明确缺氧/复氧损伤模型的建立。结果 与AMCMs贴壁后2 h相比,贴壁后24和48 h的细胞存活率无显著下降,贴壁后72 h的细胞存活率显著下降;AMCMs细胞结构完整,可进行腺病毒转染,36和48 h转染效率分别可达82.07%±0.60%和82.84%±1.18%;缺氧/复氧诱导AMCMs可成功建立细胞损伤模型,PI染色阳性细胞达42.28%±3.10%。结论 本研究应用非Langendorff方法分离培养的AMCMs,细胞存活率高,并建立腺病毒转染和缺氧/复氧诱导细胞损伤模型,为体外建立AMCMs基因修饰、缺氧/复氧损伤模型提供了简单易行的系统方法。
www.dxy.cn目的 探讨抗肌球蛋白单克隆抗体2G4/寡核苷酸/阳离子脂质体复合物(mAb2G4/ODN/lip)在H9C2心肌细胞缺氧复氧模型中的作用及机制.方法 将培养的心肌细胞按随机数字表法分为五组:正常对照组(C组)、单纯缺氧-复氧组(IR组)、mAb2G4/ODN/lip 2μg处理组(L组)、mAb2G4/ODN/lip 4μg处理组(M组)和mAb2G4/ODN/lip 6 μg处理组(H组).C组不作任何处理;IR组细胞孔加入生理盐水;其余三组加入不同剂量mAb2G4/ODN/lip处理细胞4h,更换普通培养基继续培养20 h.各实验组再进行缺氧2h复氧1h处理.MTT法测五组心肌细胞活力;ELISA法测TNF-α、IL-6、IL-8、AST、CK及SOD的浓度.结果 与C组比较,其余四组细胞活力明显下降,TNF-α、Ⅱ-6、IL-8、AST、CK浓度明显升高,SOD浓度明显降低(P<0.01);与IR组比较,L组和M组细胞活力明显上升,TNF-α、IL-6、IL-8、SOD浓度明显升高,AST、CK浓度明显降低(P<0.01).与L组比较,M组和H组TNF-α、IL-6、IL-8和SOD浓度明显升高,AST、CK浓度明显降低(P<0.01).结论 mAb2G4/ODN/lip 2μg、4 μg处理能够通过特异性的结合受损心肌细胞,抑制炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8的表达,降低AST、CK表达,升高SOD浓度,对缺氧复氧心肌细胞起到保护作用.
www.so.com2019年10月15日 - 【摘要】:心肌细胞缺氧/复氧模型是模拟心肌缺血再灌注损伤及相关疾病的经典细胞模型,具有操作便捷、直观形象、稳定性好等优势,可准确反映疾病细胞水平...
www.so.com中文文献心肌细胞缺氧/复氧模型的建立方法及能量代谢检测指标的研究进展 Research progress in the establishment of hypoxia/reoxygenation model of cardiomyocytes and ...
www.so.com2019年1月1日 - 心肌细胞缺氧/复氧模型(hypoxia/re-oxygenation,H/R)是体外从细胞水平研究心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MI/RI)的理想...
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