细胞是小鼠来源的神经瘤母细胞。 N2a细胞是由R·J·Klebe和F·H·Ruddle经A株白鼠的自生肿瘤建立的。这种细胞产生大量微管蛋白,此蛋白在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系...
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www.so.com目的:比较5种不同分化培养方法对小鼠神经母细胞瘤N2a细胞形态、分化情况、分化标志物及增殖、凋亡的影响。方法:N2a细胞分别以D10[DMEM+10%胎牛血清(FBS)]完全培养基和不同分化培养基D1(DMEM+1%FBS)、D0(不含FBS的DMEM培养基)、30%OM(DMEM+30%Opti-MEMⅠ)、D2+视黄酸(RA)(DMEM+2%FBS+10μmol·L-1 RA)和D1+RA(DMEM+1%FBS+10μmol·L-1RA)培养后显微镜眀场随机拍照,观察不同时间点的分化比例、突起长度及突起数量;免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测神经元标志物的表达;EdU掺入流式细胞术、CCK-8和AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测不同培养方法对细胞增殖和凋亡的影响。结果:中等密度培养条件下D0组72 h分化比例为(35.92±2.63)%,D1、30%OM、D2+RA和D1+RA组96 h分化比例分别为(10.40±2.05)%、(29.70±4.98)%、(11.37±2.56)%和(45.13±8.75)%;分化后神经元标志物微管蛋白beta-Ⅲ(βⅢ-tubulin)和生长相关蛋白43(GAP43)表达上调。D0组分化培养24 h后即可见长突起,突起以单支为主,但增殖能力较D10和30%OM组低,凋亡和死亡比例高,72 h后细胞状态差,大部分死亡。D1+RA组分化培养24 h也可见长突起,细胞呈多支生长,增殖能力也较D10和30%OM组低,凋亡和死亡比例高。30%OM组分化72 h才见较长突起,突起以两支为主,细胞增殖能力较D10组略低,但凋亡与D10组无显著差异。在低密度培养条件下30%OM可实现长时间分化培养,分化比例随培养时间的延长而增加,培养144 h分化比例达(56.22±6.27)%,突起长度(176.73±108.61)μm。结论:D0、30%OM和D1+RA分化培养方法均可实现较高比例的分化,D0和D1+RA分化和长突起的出现早于30%OM,但细胞增殖率低,凋亡比例高,不利于长时间培养;30%OM培养在低密度下可实现高分化比例和长突起,适合长时间分化培养。
www.so.com目的 观察2种不同的培养方法对小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)形态和功能的影响.方法 取冻存的细胞经复苏后,分别用DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)/Opti-MEM(1∶1)+5%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)与DMEM+10%FBS培养液进行培养,传至第7代时比较两组在细胞增殖率、细胞分化、粘附、迁移、自发凋亡方面的差异.结果 2种培养液均能用于培养小鼠神经母细胞瘤N2a细胞,DMEM+10%FBS组的细胞分化比例及粘附能力与DMEM/Opti-MEM(1∶1)+5%FBS组相比明显增高,细胞增殖率、迁移能力与细胞凋亡未见明显差异.结论 DMEM/Opti-MEM(1∶1)+5%FBS培养液可使小鼠神经母细胞瘤N2a细胞保持较低水平的分化率,因而更适合运用于诱导N2a分化的实验中.
image.so.com第二章细胞的基本功能本章教学要求耦联过程外部表现力学分析和平滑肌的生理特性1第一节细胞膜的结构和物质转运功能2一、细胞膜的结构概述3二、物质的跨膜转运被动转运指物质顺电位或化学梯度的转运过程主动转运指物质逆浓度梯度或电位梯度的转运过程4
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